固定是组织学和细胞学技术研究工作的基础。目的是使细胞和组织尽可能保存的和生活状态一样。因此，组织块、冰冻切片或细胞涂片通常需要放入固定剂中固定。固定剂的作用主要是阻止内源性溶酶体酶的自溶，抑制细菌和霉菌生长，防止组织腐败。总之，固定剂能够保存细胞和组织形态。为细胞和组织的制备打基础。
在细胞和组织研究过程中固定剂扮演着保护角色。固定剂通过凝固、生成添加化合物或两者结合，使蛋白质改变。在蛋白质结构内发生构造改变，引起酶的失活。固定剂除了改变细胞和组织的化学性质外，对细胞和细胞外成分还可引起物理改变。活细胞被包在一种不能穿透的膜中。固定剂损坏了这个屏障，使相关大分子穿透和逸出。
其实，细胞浆经历的是一种本质上溶胶冻改变，这种改变伴有大量多孔蛋白质网形成，进一步让大分子穿透。不同固定剂产生多孔蛋白质网的程度不同。凝固固定剂 B5和甲醛，如福尔马林比非凝固固定剂形成蛋白质网的孔隙要大些。在免疫组织化学研究中选用固定剂保存抗原时，这种改变显得特别重要。但是，印片或涂片中多数表面抗原除外。
固定液的选择
根据固定液的性质、组织的类型和被证实的组织成分恰当地选用固定液。由固定剂配制的溶液称为固定液。固定液有单一固定液和复合固定液。在制作HE切片时，甲醛作为尸检和活检组织的常规固定液。在所有固定剂中甲醛的应用范同最广，与其他固定液相比它是一种相对完美的固定液。甲醛对组织不会有明显的损害，10%中性缓冲福尔马林是一种良好的常规固定液。
醛基础固定剂包括甲醛和多聚甲醛，多聚甲醛是甲醛以聚合物形式存在的一种白色固体试剂。因为甲醛液中含有稳定剂甲醇对酶反应不利。在一些酶组织化学反应时多选用4%多聚甲醛固定。
4%多聚甲醛常用于动物灌注固定及后固定(动物器官经该液灌注后取材，再用该液浸泡2-24h)，多聚甲醛在组织形态学研究中被广泛应用。4%多聚甲醛也是免疫组织化学(原位杂交)研究时首选固定剂。多聚甲醛(甲醛)对于细胞浆抗原和膜结合的免疫球蛋白具有稳定的固定效果。厚度不超过0.3cm的小组织固定1～3h。大点的组织固定6-i2h。
甲醛和多聚甲醛长时间固定对组织抗原的保存不利。组织在醛基础固定液中停留的时间越长抗原遮蔽越明显抗原丢失的越多，在进行免疫组化染色时抗原性表达就越弱。为了克服醛类固定剂的弱点，可以采用抗原修复的办法适当弥补抗原表达弱的去缺点。
较福尔马林-丙酮混合应用于淋巴细胞标记物的固定。白细胞表面抗原常选用无水丙酮固定。
Zenker液适用于网状内皮组织包括淋巴结、牌、胸腺和骨髓的固定。此固定液能使组织的胞核和胞浆得到良好的固定。Zenker 液是一种良好的核固定剂。该液是细胞学及病理学常用的固定剂，最适合于造血和网状内皮组织的固定。也常作为三色染色的组织固定剂，在三色染色中还作为媒染剂使用。但对于含血量较多的组织尽量不要选Zenker 液固定。含血量多的组织经Zenker 液固定后会产生大量黑色的采沉积物，不利于染色和观察。
Bouin液被推荐用于卑丸、胃肠道和内分泌组织的固定。也常作为媒染剂使用。对脂肪组织的固定效果较好，适用于含脂肪较多的组织标本的固定。如含脂肪较多的淋巴结、脂防瘤、乳腺组织等。有些资料表明Bouin液也常用于组织抗原的保存。肾组织活检和组织学制备常选用乙醇Bouin液(duboseq-brazil fluid)固定。该固定液不含汞，染色前不需要脱汞处理，
B-5阳定液常作为骨髓活检常规固定液，并且对淋巴结的固定效果也比较好。
戊二醛用于电镜组织标本的固定。戊二醛要用缓冲液配制并在4℃冰箱保存，配制后一般保存3个月。电镜检查的组织更要及时固定，组织要新鲜，为了增强固定，组织块最好不超过1mm厚。
醇特别是乙醇主要用于细胞学涂片的固定，95%乙醇固定速度快而且便宜。因为涂片仅仅是细胞的厚度，涂片不是切片，在固定时不会发生组织收缩和变脆的问题。
冰冻切片的固定以甲醇和乙醇最好，可以任选。
固定液固定的因素
1.固定的及时性
组织一旦离体必需及时剖开固定(1小时内，特殊标本和胃癌必需在半小时内)
2.固定液的量
大于组织的4-10倍以上
3.固定液的厚度
福尔马林渗透的速度：2-3mm左右/24小时(实体组织)，4mm左右/24小时(多孔组织)
甲醛对组织的渗透速度与固定速度的关系 |
固定时间 | 渗透组织厚度/h | 固定组织的厚度/h |
1h | 3.6mm | 3.6mm |
4h | 7.2mm | 1.8mm |
16h | 14.4mm | 0.9mm |
64h | 28.8mm | 0.45mm |
256h | 56.6mm | 0.225mm |
4.固定的温度
20°C-37°C，一般为室温，温度过高，固定速度虽然加快了，但组织温度上升的速度会更快，促使组织中央区域的细胞变性，特别是较厚的组织。同时为了防止抗原丢失及DNA的片段化，固定液加温最高不要超过37°C(3-5小时)。
5.固定的时间
大标本需切开固定12-24小时，取材后继续固定4-6小时;新鲜小组织须固定4-8小时;总固定时间不超过48小时。
常用固定液的选择
1. 10%中性缓冲福尔马林
用途：10%中性缓冲福尔马林是一种良好的常规固定剂。此液是在低渗缓冲离子中pH6.8。
试剂：磷酸二氢钠4.0g，磷酸氢二钠6.5g，37%甲醛100ml，蒸馏水900ml，充分混合，标记pH和日期。
固定时间：标本固定1-4h，大标本应延长固定时间。
2. 4%多聚甲醛固定液
用途：进行免疫组织化学方法研究时常选用该固定液。动物灌注固定及后固定(动物器官经该液灌注后，取材，再用该液浸泡2～24h)也常选该固定液固定。
试剂：多聚甲醛40g，PBS(0.1mol/L pH7.4)500ml，混合后加热至60℃，搅拌并滴加1NNaOH至溶液清亮为止，冷却后加PBS至总量1000ml。
固定时间：固定24h。
3. B一5固定液
用途：B一5固定液是骨髓活检常规固定液，并且在怀疑淋巴瘤时固定淋巴结。
试剂：B一5贮备液：氯化汞12.0g，醋酸钠2.5g，蒸馏水200.0ml，充分混合，不使用任何金属用具或金属类盖子，贮备液自配制之日起稳定性1年。
工作液：贮备液20.0ml，甲醛2.0ml，使用前立即混合。丢弃时按有害废物管理处理。
固定时间：2～4h，在容器上注明时间，不要遗忘过夜。
4. Bouin液
用途：是一种良好的外科活检标本常规旧定液，也常作为媒染剂使用。对脂肪组织的固定效果较好，适用于含脂防较多的组织标本的固定。如含脂肪较多的淋巴结、脂肪瘤、乳腺组织等。
试剂：Bouin固定液：饱和苦味酸3000ml，甲醛1000ml，冰醋酸200ml。
固定时间：小块活检组织固定2～4h，大标本可固定3d。
5. 乙醇Bouin液(duboscq—brazil fluid)
用途：用于固定肾活俭，组织学制备固定液。
试剂：乙醇Bouin贮存液：80%乙醇750.0ml,甲醛300.0ml，苦味酸5.0g，允分混合，液体稳定性2年。标明配制日期。
工作液：贮存液70.0ml，醋酸5.0ml，使用前加醋酸。
固定时间：1～4h
6.Hollande液
用途：作为胃肠和前列腺活检基本固定剂，这种固定剂让HE染色更清晰，它“软化”组织避免切片脆裂。苦味酸会溶解掉红细胞。
Lillie认为该液是一种很好的骨髓活检标本固定剂，固定液中的醋酸可以脱钙。
试剂：乙酸铜75.0g，蒸馏水3000.0ml，苦味酸120.0g，甲醛300.0ml，冰醋酸45.0ml。
不要加热，用蒸馏水溶解乙酸铜，慢慢加入苦味酸，搅拌至溶解。加入甲醛和醋酸。标明配制日期。
固定时间：小标本2～4h。大标本4d。
7.0RTH液
用途：用于证实肾上腺胞浆中嗜铬微粒，这种证明可能对嗜铬细胞瘤的诊断很重要。但不是一种好的多用途的固定剂。
原理：嗜铬微粒被染成橙色到棕色，pH 5-6反应最强烈。
试剂：Orth贮存液：重铬酸钾25.0g，硫酸钠10.0g，蒸馏水1000.0ml，充分混合，标明日期。
固定时间：固定24h。
8.Zenker液
用途：Zenker液是一种核固定剂。该液是细胞学及病理学常用的固定剂，对细胞核固定最好，最适合于造血和网状内皮组织的固定。也常作为三色染色的组织固定剂，在三色染色中还作为媒染剂使用。但对于含血量较多的组织标本尽量不要选Zenke液固定。
试剂：Zenker贮备液：氯化汞50.0g，重络酸钾25.0g，硫酸钠10.0g，蒸馏水1000.0ml，充分混合。稳定性2年。
Zenker工作液：Zenker贮备液95.0ml，冰醋酸5.0ml。
用前混合，丢弃时按有害废物管理处理。
固定时间：12～36h。
